Slajd mikroskopowy - Microscope slide
Szkiełko mikroskopu jest cienki płaski kawałek szkła , zwykle 75 do 26 mm (3 cali) od 1 do około 1 mm grubości, stosowane do przedmiotów zawieszone na badanie pod mikroskopem . Zazwyczaj obiekt jest mocowany (zabezpieczany) na szkiełku, a następnie oba są umieszczane razem w mikroskopie w celu obejrzenia. Taki układ umożliwia szybkie wkładanie i wyjmowanie z mikroskopu kilku obiektów osadzonych na szkiełku, oznaczanie, transportowanie i przechowywanie w odpowiednich pudełkach lub folderach na szkiełka itp.
Szkiełka mikroskopowe są często używane razem ze szkiełkiem nakrywkowym lub szkiełkiem nakrywkowym, czyli mniejszą i cieńszą taflą szkła, którą umieszcza się na próbce. Preparaty są utrzymywane w miejscu na stoliku mikroskopu za pomocą zacisków do preparatów, zacisków do preparatów lub stolika krzyżowego, który służy do precyzyjnego, zdalnego przesuwania preparatu na stoliku mikroskopu (np. w systemie zautomatyzowanym/komputerowym lub w przypadku dotknięcia slajd z palcami jest nieodpowiedni ze względu na ryzyko zanieczyszczenia lub brak precyzji).
Historia
Początkiem koncepcji były kawałki kości słoniowej lub kości , zawierające okazy trzymane między krążkami przezroczystej miki , które wsuwały się w szczelinę między sceną a obiektywem. Te „suwaki” były popularne w wiktoriańskiej Anglii, dopóki Królewskie Towarzystwo Mikroskopowe nie wprowadziło standardowego szkiełka mikroskopowego.
Wymiary i typy
Standardowe szkiełko mikroskopowe mierzy około 75 mm na 25 mm (3″ na 1″) i ma około 1 mm grubości. Dostępny jest szereg innych rozmiarów do różnych celów specjalnych, takich jak 75 x 50 mm do zastosowań geologicznych , 46 x 27 mm do badań petrograficznych i 48 x 28 mm do cienkich przekrojów . Slajdy są zwykle wykonane ze zwykłego szkła, a ich krawędzie są często drobno szlifowane lub polerowane.
Szkiełka mikroskopowe są zwykle wykonane ze szkła o jakości optycznej , takiego jak szkło sodowo-wapniowe lub szkło borokrzemianowe , ale stosuje się również specjalistyczne tworzywa sztuczne. Szkiełka ze stopionego kwarcu są często używane, gdy ważna jest przejrzystość w ultrafiolecie , np. w mikroskopii fluorescencyjnej .
Chociaż najpopularniejsze są zwykłe slajdy, istnieje kilka wyspecjalizowanych typów. Suwak wgłębienie lub wnękę suwak ma jeden lub więcej wgłębień płytkich ( „studnie”), przeznaczone do przechowywania przedmiotów, nieco grubsze i próbki, takie jak płyny i kultur tkankowych . Slajdy mogą mieć zaokrąglone rogi w celu zwiększenia bezpieczeństwa lub wytrzymałości, lub ścięty róg do użytku z zaciskiem ślizgowym lub stołem krzyżowym, gdzie slajd jest zabezpieczony sprężynowym zakrzywionym ramieniem stykającym się z jednym rogiem, wymuszając przeciwległy róg ślizgać się po ramieniu ustawionym pod kątem prostym, które się nie porusza. Gdyby ten system był używany z prowadnicą, która nie zawierałaby tych ściętych rogów, rogi uległyby wykruszeniu, a prowadnica mogłaby się rozbić.
Suwak Siatka jest oznaczona sieci linii (na przykład 1 mm do sieci), który umożliwia rozmiaru obiektów widzianych w powiększeniu być łatwo oszacowane i dostarcza powierzchni odniesienia do liczenia przedmiotów na minutę. Czasami jeden kwadrat siatki zostanie podzielony na drobniejszą siatkę. Preparaty do specjalistycznych zastosowań, takich jak hemocytometry do liczenia komórek, mogą mieć na górnej powierzchni wytrawione lub oszlifowane różne zbiorniki, kanały i bariery . Różne trwałe oznaczenia lub maski mogą być drukowane , piaskowane lub umieszczane na powierzchni przez producenta, zwykle przy użyciu materiałów obojętnych, takich jak PTFE .
Neubauer wsunąć do liczenia komórek.
|
Zdjęcie mikroskopowe siatki slajdu Neubauera używanej do liczenia komórek .
|
Niektóre slajdy mają z jednej strony matowy lub pokryty emalią obszar do oznaczania ołówkiem lub długopisem. Szkiełka mogą mieć specjalne powłoki nakładane przez producenta, np. dla obojętności chemicznej lub zwiększonej adhezji komórek . Powłoka może mieć stały ładunek elektryczny, aby utrzymać cienkie lub sproszkowane próbki. Typowe powłoki to poli-L-lizyna , silany , żywice epoksydowe , a nawet złoto .
Montowanie
Mocowanie próbek na szkiełkach mikroskopowych jest często krytyczne dla pomyślnego oglądania. Problemowi poświęcono wiele uwagi w ciągu ostatnich dwóch stuleci i jest to obszar dobrze rozwinięty z wieloma wyspecjalizowanymi, a czasem dość wyrafinowanymi technikami. Próbki są często utrzymywane na miejscu za pomocą mniejszych szklanych szkiełek nakrywkowych .
Główną funkcją szkiełka nakrywkowego jest utrzymywanie próbek stałych sprasowanych na płasko, a próbek ciekłych uformowanych w płaską warstwę o równej grubości. Jest to konieczne, ponieważ mikroskopy o wysokiej rozdzielczości mają bardzo wąski obszar, w którym się skupiają.
Szkło nakrywkowe pełni często kilka innych funkcji. Utrzymuje preparat w miejscu (albo ciężarem szkiełka nakrywkowego, albo, w przypadku montażu na mokro, przez napięcie powierzchniowe ) i chroni preparat przed kurzem i przypadkowym kontaktem. Chroni soczewkę obiektywu mikroskopu przed kontaktem z preparatem i odwrotnie; w mikroskopii immersyjnej lub w mikroskopii immersyjnej szkiełko nakrywkowe zapobiega kontaktowi płynu immersyjnego z próbką. Szkiełko nakrywkowe można przykleić do szkiełka, aby uszczelnić próbkę, opóźniając odwodnienie i utlenianie próbki, a także zapobiegając zanieczyszczeniu. Stosowanych jest wiele uszczelniaczy, w tym uszczelniacze komercyjne, preparaty laboratoryjne, a nawet zwykły bezbarwny lakier do paznokci , w zależności od próbki. Niezawierający rozpuszczalników uszczelniacz, który można stosować do próbek żywych komórek, to „valap”, mieszanina wazeliny , lanoliny i parafiny w równych częściach. Kultury drobnoustrojów i komórek można hodować bezpośrednio na szkiełku nakrywkowym przed umieszczeniem go na szkiełku, a próbki mogą być trwale umieszczane na szkiełku zamiast na szkiełku.
Szkiełka nakrywkowe są dostępne w różnych rozmiarach i grubościach. Użycie niewłaściwej grubości może spowodować aberrację sferyczną oraz zmniejszenie rozdzielczości i intensywności obrazu. Obiektywy specjalne mogą być używane do obrazowania próbek bez szkiełek nakrywkowych lub mogą być wyposażone w kołnierze korekcyjne, które pozwalają użytkownikowi dostosować się do innej grubości szkiełka nakrywkowego.
Montaż na sucho
W montażu suchym , najprostszym rodzaju montażu, przedmiot jest po prostu umieszczany na slajdzie. Na wierzchu można umieścić szkiełko nakrywkowe, aby chronić preparat i obiektyw mikroskopu oraz utrzymać preparat nieruchomo i dociśnięty płasko. Oprawa ta może być z powodzeniem stosowana do oglądania okazów, takich jak pyłki, pióra, włosy itp. Służy również do badania cząstek zatrzymanych w przezroczystych filtrach membranowych (np. w analizie pyłu unoszącego się w powietrzu ).
Montaż na mokro lub montaż tymczasowy
W mokrym osadzie próbkę umieszcza się w kropli wody lub innej cieczy trzymanej między szkiełkiem a szkiełkiem nakrywkowym przez napięcie powierzchniowe . Ta metoda jest powszechnie stosowana, na przykład, do oglądania mikroskopijnych organizmów, które rosną w wodzie ze stawu lub innych płynnych mediach, zwłaszcza podczas badania ich ruchu i zachowania. Należy uważać, aby wykluczyć pęcherzyki powietrza, które zakłócałyby oglądanie i utrudniały ruchy organizmów. Przykładem tymczasowego mocowania na mokro jest mocowanie do laktofuksyny , które zapewnia zarówno mocowanie próbki, jak i barwienie fuksyną .
Gotowe mocowanie lub mocowanie stałe
Do badań patologicznych i biologicznych preparat zwykle poddaje się złożonemu przygotowaniu histologicznemu , polegającemu na utrwaleniu go w celu zapobieżenia gniciu, usunięciu zawartej w nim wody, zastąpieniu wody parafiną , pocięciu go na bardzo cienkie skrawki za pomocą mikrotomu , umieszczeniu skrawków na szkiełko mikroskopowe, barwiące tkankę różnymi barwnikami w celu odsłonięcia określonych składników tkanki, oczyszczające tkankę w celu nadania jej przezroczystości i pokrywające szkiełkiem nakrywkowym i środkiem do zamykania.
Posypane mocowanie
Mocowanie rozsiane opisuje produkcję szkiełek palinologicznych do mikroskopów poprzez zawieszenie stężonej próbki w wodzie destylowanej , umieszczenie próbek na szkiełku i umożliwienie odparowania wody .
Materiały montażowe
Czynnikiem, jest rozwiązanie, w którym wzór jest osadzony, na ogół w szklanej pokrywie. Proste ciecze, takie jak woda lub glicerol, można uznać za środki do mocowania, chociaż termin ten ogólnie odnosi się do związków, które twardnieją do trwałego mocowania. Popularne środki do zatapiania obejmują Permount i Hoyer's medium do zatapiania oraz alternatywną galaretkę glicerynową Właściwości dobrego środka do zatapiania obejmują posiadanie współczynnika załamania światła bliskiego współczynnikowi szkła (1,518), brak reaktywności z próbką, stabilność w czasie bez krystalizacji, ciemnienie, lub zmieniający się współczynnik załamania światła, rozpuszczalność w ośrodku, w którym przygotowano próbkę ( wodnym lub niepolarnym , takim jak ksylen lub toluen ) i nie powodując blaknięcia lub wypłukiwania zabarwienia próbki.
Przykłady mediów montażowych
Wodny
Powszechnie stosowany w cytochemii immunofluorescencyjnej, gdzie fluorescencji nie można zarchiwizować. Tymczasowe przechowywanie musi odbywać się w ciemnej, wilgotnej komorze. Typowe przykłady to:
- Glicerol-PBS (9:1) z antykami, np. którykolwiek z poniższych
- p-fenylenodiamina
- galusan propylu
- 1,4-Diazabicyklo (2,2,2)-oktan (DABCO) (bardzo popularny)
- Kwas askorbinowy
- Mowiol lub Gelvatol
- żelatyna
- Uchwyt
- Vectashield
- Przedłużyć złoto
- CyGEL / CyGEL Sustain (unieruchomienie żywych, nieutrwalonych komórek i organizmów)
Bezwodny
Używane, gdy wymagane jest mocowanie na stałe
- Permount (toluen i polimer a-pinenu, b-pinenu, dipentenu, b-fellandrenu)
- balsam kanadyjski
- DPX ( D istrene 80 - w handlu polistyrenu , A P lasticizer przykład ftalan dibutylu i ksylen )
- DPX nowy (z ksylenem, ale wolny od rakotwórczego ftalanu dibutylu )
- Entellan (z toluenem)
- Entellan nowy
- Hempstead Halide Hoyer's Medium (zastrzeżony preparat tradycyjnego podłoża Hoyer's zawierający 60% chloralu , ale wolny od znanych czynników rakotwórczych)
- Neo-Mount (kompatybilny z neo-clearem alifatycznym, ale niekompatybilny z rozpuszczalnikami aromatycznymi, takimi jak ksylen)
Kontrastujące z innymi rodzajami/znaczeniami „montażu”
W przeciwieństwie do montażu koniecznego do szklanych szkiełek nakrywkowych, nieco podobny montaż można wykonać w przypadku przechowywania większych okazów w szklanych pojemnikach w muzeach. Jednak do przygotowania próbki stosuje się zupełnie inny rodzaj montowania , który może dotyczyć materiałów biologicznych lub niebiologicznych i jest dalej podzielony na procesy montowania typu „na gorąco” (ściskanie) i „na zimno” (odlewanie). Choć nazwany „montowaniem”, jest bardziej zbliżony do osadzania w histologii i nie należy go mylić z opisanym powyżej montażem. Termin montaż w innych dziedzinach ma wiele innych znaczeń.